各位师兄师姐,请问培养基在使用过程中应注意哪些问题

各位师兄师姐,请问培养基在使用过程中应注意哪些问题
各位师兄师姐,请问培养基在使用过程中应注意哪些问题

各位师兄师姐,请问培养基在使用过程中应注意哪些问题
博凌科为生物科技-为你1）培养基在使用前需37℃预热或在室温平衡后再使用.（2）细胞培养过程中,吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼,防止残留在吸管内的培养基焦化,将有害物质带入培养液中.（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间.（4）避免液体间、细胞间的交叉污染.（5）配制完全培养基时,配制的量最好在2周内用完为好.

1.购置培养基时要求供应商提供产品质控证书。使用前首先对外观、批号、pH 值、灭菌要求、选择性等进行初步评估，。
2.培养基的使用应在有效期内，不同批号的培养基不要混合使用。干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官...

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1.购置培养基时要求供应商提供产品质控证书。使用前首先对外观、批号、pH 值、灭菌要求、选择性等进行初步评估，。
2.培养基的使用应在有效期内，不同批号的培养基不要混合使用。干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。
3.培养基的配制：使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。
4.培养基的灭菌
一般培养基可采用121℃ 高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。
某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃ 左右的培养基中。
琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。
已配制好的培养基必须及时灭菌（在2小时内），避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。
5 培养基的性能测试
5.1 外观 控制制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否蒸发／脱水。
5.2pH测定
微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH 值，即培养基使用前的pH，并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量，固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。使用过程中，如果需要调整培养基的pH，应用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL调整，注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。
5.3 污染控制 从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验)，确定无微生物生长方可使用。
5.3 性能测试 可按2010版药典附录微生物限度检查法及无菌检查法中的规定进行适用性检查。（对微生物限度检查法中用到的培养基的适用性检查，在2010版中国药品检验标准操作规程：微生物限度检查法章节中对实验操作有详细说明。）
6.培养基的保存
灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量，应该是在最长保存期限内正好使用完(2-25℃避光的环境，若保存于非密封容器，3周内使用，密闭容器可使用一年----2010版药典规定。）含染料的培养基应闭光保存；倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完，应于冷藏保存，如果保存时间超过2天，应将其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期，应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。

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