本人现在在做Western-Blot.蛋白质浓度太低了!想浓缩!请问加了SDS的蛋白质怎么浓缩?至少要浓度五倍以上!

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/03 05:51:41
本人现在在做Western-Blot.蛋白质浓度太低了!想浓缩!请问加了SDS的蛋白质怎么浓缩?至少要浓度五倍以上!

本人现在在做Western-Blot.蛋白质浓度太低了!想浓缩!请问加了SDS的蛋白质怎么浓缩?至少要浓度五倍以上!
本人现在在做Western-Blot.蛋白质浓度太低了!想浓缩!请问加了SDS的蛋白质怎么浓缩?
至少要浓度五倍以上!

本人现在在做Western-Blot.蛋白质浓度太低了!想浓缩!请问加了SDS的蛋白质怎么浓缩?至少要浓度五倍以上!
蛋白质上样量20ug,牛奶封闭过夜,一抗浓度按照说明书配制,孵育过夜.二抗一小时.掌握好曝光时间.
冷冻真空抽干.

可以冷冻抽,也可以直接正空抽,也可以直接在吹风台上吹。冷冻抽干后样品还要重新煮一遍。
WB没有条带?
浓缩样品应该效果不会很好吧,应该适当增加一抗浓度,或者延长曝光时间。
提醒下试验最好有正负对照。

你先确定是蛋白浓度太低,可以用样品做个紫外吸光的测定,对照下抗体的最低灵敏度
其实你还不如重新表达蛋白提取呢,浓缩蛋白有种带膜的柱子,但是很麻烦
如果没变性的话还可以过层析柱

如果因为蛋白质浓度太低了,在进行Western检测的时候可以用高灵敏度的显色液进行显色。