作业帮在提取DNA时,要用75%预冷乙醇进行DNA沉淀,请问其机理是什么?为什么不用95%或纯的乙醇或甲醇等其他有机溶剂?哦可能我弄反了,我想知道为什么用乙醇沉淀DNA?它的机理是什么呢?是极性不同还是
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/10 20:24:38
在提取DNA时,要用75%预冷乙醇进行DNA沉淀,请问其机理是什么?为什么不用95%或纯的乙醇或甲醇等其他有机溶剂?哦可能我弄反了,我想知道为什么用乙醇沉淀DNA?它的机理是什么呢?是极性不同还是
在提取DNA时,要用75%预冷乙醇进行DNA沉淀,请问其机理是什么?
为什么不用95%或纯的乙醇或甲醇等其他有机溶剂?
哦可能我弄反了,我想知道为什么用乙醇沉淀DNA?它的机理是什么呢?是极性不同还是电荷影响?或是其它?
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在提取DNA时,要用75%预冷乙醇进行DNA沉淀,请问其机理是什么?为什么不用95%或纯的乙醇或甲醇等其他有机溶剂?哦可能我弄反了,我想知道为什么用乙醇沉淀DNA?它的机理是什么呢?是极性不同还是
可我提取的时候好像是用95%的乙醇沉淀的,而后再用70%的乙醇洗涤.
1.为什么用无水乙醇沉淀DNA?
用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法.乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂.
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合.一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67％左右.因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）.但是加95％的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率.折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇.也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15－30分钟即可.
2.在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.0.25mol/L?
在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好.在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀.