密度梯度离心法提取的叶绿体是否纯净说明原因

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/12 19:34:12

密度梯度离心法提取的叶绿体是否纯净说明原因
密度梯度离心法提取的叶绿体是否纯净
说明原因

密度梯度离心法提取的叶绿体是否纯净说明原因
用钻空子的思想来说的话,
肯定不纯,细胞破碎时,细胞中的某些组分很可能变成和叶绿体一样的大小,
平衡密度梯度离心法.用超离心机对小分子物质溶液,长时间加一个离心力场达到沉降平衡,在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度.若在该溶液里加入少量大分子溶液,则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降,比溶剂密度小的部分就会上浮,最后在重力和浮力平衡的位置,集聚形成大分子带状物
原理嘛,通俗来就说就是按重量来分的.
正常人思维,以上因素是不考虑的,因为,细胞中的某些组分很可能变成和叶绿体一样的大小,的概率只有天才知道,
只要知道原理就好理解,
再有就是吸取时,可能有误差,
1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用.
2、先以5000g离心15分钟后,获取上清夜,然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜.
3、接着10万g超速离心2h,将沉淀用少量STE溶解.
4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液,然后在离心管中依次加入30 % ,45 % ,60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的.11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带,用长针头将两条不同部位的带都吸取出来,分别收集到不同的瓶内.
5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒,然后11万g离心3h,用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起,即最后获得了纯化的病毒.-20度冻纯备用,用时可用分光光度计测定其病毒含量.

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