T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/01 19:20:42
T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?

T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?
T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?

T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?
T载体又叫T质粒载体,是指T4噬菌体DNA连接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接.
DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶.两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来.
T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先,T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后,酶-ATP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化；最后产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来.连接反应通常将两个不同大小的片断相连.
形象的说,DNA水解酶相当于剪刀,剪断DNA,而T载体（DNA连接酶）就相当于针线.如果克隆时不用,就不能将DNA连接起来.

我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。

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