设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/03 00:23:54
设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤

设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤
设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达
要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤

设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤
考查内容主要是构建表达载体并转化入大肠杆菌.
1.目的片段的获得:可以采用PCR的方法获得目的片段,目的基因的侧翼序列是已知的,那么通过已知序列设计引物可以获得目的片段的PCR产物;然后经过电泳并回收目的片段
2.获得目的片段的回收片段后可以用目的基因内没有而侧翼序列中有的限制性内切酶进行消化并产生粘性末端.
3.用同样的限制酶切割载体(载体的获得需要对包含目的载体的大肠杆菌进行培养后提取质粒.),当然前提是载体的多克隆位点中包含步骤2中使用的酶的切割位点.
4.用连接酶将目的片段连入表达载体中.然后转化大肠杆菌
5.获得阳性转化子,再次进行质粒提取并进行鉴定(酶切鉴定或测序鉴定)
7.表达载体转入蛋白表达菌株并进行诱导表达.
上述步骤已经包含了要求的所有实验方法.

设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤 新基因功能的研究方法设计实验,研究一新基因功能.简述流程. 设计一个基因克隆的实验方案 已知大鼠脑组织中蛋白质的DNA序列,如何设计实验,克隆大鼠的基因并得到重组蛋白 设计一个实验进行特定基因的克隆测序 基因表达实验流程是什么? 我做了分子生物学实验,是质粒的重组,把外源基因插入到一个质粒里,这个质粒当中SPECT是标记物~~~我做了分子生物学实验,是质粒的重组,把外源基因插入到一个质粒里,这个质粒当中SPECT是标记 为什么肺炎双球菌的转化实验的实质是基因重组 肺炎双球菌的转化实验的实质是基因重组吗? 基因重组的概念 基因重组的定义 关于基因重组的 基因重组的步骤 定向敲除要考虑移码突变吗?我要用同源重组的方法进行基因敲除,就是用一段kan抗性基因替代我的目标基因,我想同源重组时同源臂的选择是不是要紧紧挨着目标基因一个碱基都不差?kan抗性的 载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒. 如何进行一个完整的DNA重组技术,实现从DNA到蛋白质?要求设计一个完整的实验方案 基因重组与基因工程问题基因重组不是有性生殖的生物才发生的吗?基因工程不也是基因重组吗?但是做的题目中 有把人的胰岛素基因导入细菌 这为啥算基因重组? 质粒构建的过程中,如果是想把α基因与A质粒重组,但为什么要先与一个B质粒先重组再构建呢?就算这个可能是鉴定α基因是不是被正确提取,但是为什么与B质粒重组的重组质粒不能鉴定基因是